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癫痫患者外周血P糖蛋白水平检测的临床意义

时间:2016-10-15 20:16来源:首席医学网 作者:杨美兰 陈晓燕 点击:
作者:杨美兰 陈晓燕 张允奇 何莉 黄宗清 李爱东    作者单位:518003 深圳市第四人民医院神经内科
 
【摘要】  目的 探讨外周血P糖蛋白水平与难治性癫痫耐药性的关系。方法 32例癫痫患者分为难治性癫痫组(IE组)16例及非难治性癫痫组(NIE组)16例,同时纳入健康体检者16例作为对照组。用流式细胞仪检测各组血中P糖蛋白(Pgp)的表达。结果 IE组血清Pgp(3.3%±0.6%)明显高于NIE组(2.6%±0.5%)和对照组(2.3%±0.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Pgp在癫痫耐药的发病机制中起重要作用,其在外周血的高表达可作为癫痫患者耐药的一个客观指标。
 
【关键词】  癫痫 难治性 P糖蛋白 流式细胞术
 
难治性癫痫(intractable epilepsy,IE)是神经学科研究的热点及难点之一,癫痫耐药是一个由多种因素参与的复杂过程,其发作呈随机性,极易误诊及漏诊。IE的诊断标准不一,较公认的IE诊断标准需要经过长期的口服抗癫痫药物(AEDs)及临床观察才能诊断[1,2],既往对IE的研究从患者手术切除或动物模型的脑组织着手,取材的限制严重影响临床研究及应用,迫切需要寻求客观的外周指标,以扭转目前IE诊治中的被动局面。我们利用半定量的流式细胞仪(FCM)技术检测癫痫患者外周血中P糖蛋白(Pgp)的表达以探讨多药耐药(MDR)在IE中的作用。
 
    1  资料与方法
 
    1.1  临床资料  2004年1月—2008年8月深圳第四人民医院神经内科及儿科就诊的癫痫患者32例。分为2组:(1)难治性癫痫组(IE组):男9例,女7例,年龄10~46(30±14)岁,病程3~9(5.1±1.5)年,均有典型癫痫发作史及脑电图表现,符合IE诊断[1],其中复杂部分性发作2例,部分继发全身强直3例,继发强直—阵挛性发作5例;多种发作形式6例。已联用2种一线AEDs,入院时检测AEDs浓度,见表1。(2)非难治性癫痫组(NIE组):男女各8例,年龄12~49(31±13)岁,病程2~6(4.3±1.4)年,均有典型癫痫发作史及脑电图表现,其中全身强直—阵挛性发作5例,部分性发作11例,经一线AEDs正规治疗2年未发作,排除其他中枢神经系统疾病或占位病变。入院时检测AEDs浓度,见表1。(3)对照组:16名,为本院无癫痫及其他疾病的健康体检者,均无癫痫发作史,男女各8例,年龄14~52(29±15)岁。
 
    1.2  主要试剂及设备  Pgp单克隆抗体CD243PE、IgG2aPE、溶血素(lysing solution)。均购自Beckman Coulter公司,库尔特Epics XL型流式细胞仪。
 
    1.3  检测方法[3]  癫痫患者均清晨空腹采集静脉血1 ml置于抗凝管,阴凉处放置2 h内采用流式细胞仪按下列方法检测Pgp的表达相对量:(1)在检测管和同型对照管中加入肝素抗凝血100 μl后,检测管中加入CD243PE 20 μl,对照管中加入IgG2aPE 20 μl,混匀后室温下避光孵育30 min;(2)加入溶血素溶血10 min;(3) PBS洗涤2次;(4)用流式细胞仪以淋巴细胞设门,收集1万个白细胞,计算Pgp表达阳性的细胞百分数。
 
    1.4  统计学方法  采用SPSS 11.5软件进行统计处理,计量数据以±s表示,组间行ANOVA分析法中的LSD法检验,P<0.05为差异有统计学意义。
 
    2  结  果
 
    IE组患者血中Pgp表达的相对量高于NIE组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而NIE组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表1。表1  3组Pgp表达相对量 注:(1)CBZ.卡马西平,VPA.丙戊酸钠,PHT.苯妥英钠;(2)与NIE组比较,*P<0.05
 
    3  讨  论
 
    癫痫的耐药机制形成复杂,至今尚未完全阐明。在临床实践中人们发现如果患者对某种AEDs耐受,往往对其他具有不同化学结构、不同作用途径、不同作用机制的一线AEDs也不敏感,于是人们猜测IE的耐药机制很可能是一种共同的、非特异性的耐药机制,即多药耐药(multidrug resistance,MDR)机制,并提出假说——多药转运蛋白学说 (multidrug transporter hypothesis),此学说认为Pgp的高表达使AEDs在癫痫病灶的浓度过低,从而导致耐药[4]。人类MDR基因族由MDR1、MDR3组成,细胞耐药性由MDR1起主导作用,其表型是分子量为170 kD、由1 280个氨基酸组成的跨膜糖蛋白(Pgp),是一种能量依赖性外排泵。在中枢神经系统中,Pgp广泛存在于脑毛细血管内皮细胞、脑实质星形胶质细胞的足突,以及大脑毛细血管质膜、蛋白质的合成、糖基化和膜转运等场所。在生理状态下Pgp可阻止外源性毒素入侵,清除内源性有毒物质,维持内环境的稳定,故正常人亦有一定的表达[5,6],本研究与之相符。当机体处于病理状态下如癫痫时,内环境的改变导致血脑屏障完整性受损,位于毛细血管内皮细胞的Pgp限制AEDs进入脑内,导致脑细胞药物浓度降低,而在神经胶质细胞和神经元细胞的Pgp可阻碍细胞内AEDs的药物作用,产生其耐药。
 
    为明确IE的发病机制,研究者开展了大量的研究工作。Brandt等[7]发现苯巴比妥耐药大鼠的海马及边缘叶Pgp显著高表达,加用Pgp拮抗剂后可恢复其抗癫痫作用,故认为Pgp的高表达参与了IE的形成,痫性活动可促进MDR1基因的高表达,而与AEDs作用无关。Baltes等[8]研究则认为Pgp高表达与癫痫发作及药物作用均有关,与本结果相似。本结果显示IE组患者外周血中Pgp表达明显高于其他2组,而IE组与NIE组的AEDs浓度差异无统计学意义(P>0.05),提示MDR在耐药机制中起到主要的作用;治疗组与对照组的Pgp表达比较无统计学差异,提示单纯的药物诱导和癫痫发作本身并不能引起外周血中MRP1的上调,其上调可能是多因素、多机制、多途径、多环节共同作用的结果。因此我们在处理IE患者时应选择多途径、多种作用机制的药物,这也是当今新型AEDs不断问世的作用点及突破口[9]。
 
    考虑到AEDs经血入脑,血中有药理作用的AEDs游离浓度与脑内起抗癫痫作用的药物浓度呈正相关关系,检测其外周血中MDR表达可同步反映其脑组织中MDR表达水平。又由于外周血取材方便、可重复性强,检测其Pgp表达有助于对病情进行实时监控,因此对IE的发病机制、临床诊治及预后评估具有极高的价值。但由于MDR基因具有多态性,Pgp的表达能与疾病易感性和特异性之间的关系以及如何适当调节Pgp还有待进一步研究。
 
【参考文献】
1 郭玉璞,王维治.神经病学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2006:1 0471 058.
 
2 程征海,李杏色,职冬悦,等.难治性癫痫耐药机制的研究进展[J].疑难病杂志,2007,6(10):633.
 
3 Lazarowski A,Sevlever G,Taratuto A,et al.Tuberous sclerosis associated with MDR1 gene expression and drugresistant epilepsy[J].Pediatr Neurol,1999,21(4): 731734.
 
4 Bankstahl JP,Hoffmann K,Bethmann K,et al.Glutamate is critically involved in seizureinduced overexpression of Pglycoprotein in the brain[J].Neuropharmacology,2008,54(6):1 0061 016.
 
5 宋玉华,罗兵,佟琳如.多药耐药相关蛋白基因在急性白血病中的表达[J].青岛大学医学院学报,2001,37(7):412413.
 
6 孔双艳,何俐,李其富.药物耐受的部分发作性癫痫的循证医学治疗实践[J].中国全科医学,2006,9(12):1 036.
 
7 Brandt C,Bethmann K,Gastens AM,et al,The multidrug transporter hypothesis of drug resistance in epilepsy: Proofofprinciple in a rat model of temporal lobe epilepsy[J].Neurobiol Dis,2006,24(1): 202211.
 
8 Baltes S,Gastens AM,Fedrowitz M,et al.Differences in the transport of the antiepileptic drugs phenytoin,levetiracetam and carbamazepine by human and mouse Pglycoprotein[J].Neuropharmacology,2007,52(2): 333346.
 
9 熊久兰,阚凤杰,冯亮飞.托吡酯治疗晚发性难治性癫痫30例[J].中国医药,2007,2(10):633.
 
 
原文链接:http://journal.9med.net/html/qikan/yykxzh/ynbzz/2009383/lz/20090531093119563_478998.html
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